Estudio serológico, microbiológico y molecular de "Streptococcus gallolyticus" subsp. "gallolyticus", asociado al cáncer colorrectal

Resumen

El objetivo de esta tesis doctoral fue el estudio de la asociación entre el cáncer colorrectal (CCR) y la exposición a microorganismos que pueden estar presentes de forma habitual en la microbiota intestinal. Debido a los continuos cambios que sufren las bacterias de nuestro intestino, determinadas poblaciones pueden verse favorecidas y provocar la formación de microclimas adversos que acaban causando daño celular a nivel de la mucosa colónica. El principal agente estudiado ha sido S. gallolyticus subsp. gallolyticus, hasta ahora conocido y englobado dentro de S. bovis, aunque también nos ha interesado conocer la exposición a Helicobater pylori y Salmonella Typhimurium por los recientes trabajos que relacionan a estas bacterias con el CCR. Para ello, por una parte, se ha desarrollado un estudio serológico en el que se ha optimizado un nuevo esquema de Serología Múltiple basado en la tecnología Luminex. Esta nueva técnica es la combinación del ensayo de inmunoabsorbancia marcada con Glutatión S-transferasa (GST) con la tecnología xMAP de Luminex y permite la detección de múltiples antígenos en un único ensayo serológico. Para su realización se ha contado con un total de 1.512 sueros procedentes de una colección de sueros de pacientes con CCR y de controles sanos pareados en edad y sexo pertenecientes a la acción transversal para el estudio del cáncer, MCC-Spain (CIBERESP). Posteriormente, aplicando herramientas moleculares y según la taxonomía actual, se ha realizado la reclasificación de una colección de aislados clínicos, inicialmente tipados como S. bovis, buscando asociaciones específicas a nivel de subespecie con los diferentes cuadros clínicos. Para la identificación de la colección de S. bovis obtenida de los archivos del servicio de Microbiología del Hospital Universitario Ramón y Cajal, se emplearon diferentes herramientas: sistema API 20 Strep (bioMérieux, Francia) y secuenciación de los genes 16S ARNr y sodA. Adicionalmente, se ha valorado la utilidad del sistema de identificación MALDI-TOF MS, basado en la espectrometría de masas para la identificación de este tipo de aislados. Por último, con el fin de profundizar más en las particularidades de la subespecie S. gallolyticus subsp. gallolyticus, se han comparado las características microbiológicas y la sensibilidad antibiótica de una colección de aislados de origen humano con otra de origen animal. Es en esta última colección, donde se ha detectado una cepa procedente de un ternero resistente a los glucopéptidos, identificándose la presencia del gen vanA dentro del transposón Tn1546-like e integrado en el cromosoma de la bacteria. La secuenciación masiva de la cepa ha permitido la correcta caracterización de este elemento, donde el análisis informático ha revelado la inversión de la parte proximal, con una deleción de 1.835 nucleótidos en el extremo final del transposón (desde la posición 9.016 a la posición 10.851 pb), que implica a los genes vanY y vanZ. El tamaño del genoma de esta cepa es un poco mayor a los anteriormente descritos (2,6 Mb) y destaca el gran número de transposasas que posee, 111 en total, asociadas a diferentes elementos (IS1167, IS1272, IS1548-like, IS4-like, IS630-SpnII e IS66). También se ha detectado la adquisición de genes de otras especies de estreptococos, así como resistencias a metales pesados y un sistema completo que codifica para la producción de bacteriocinas.