Caracterización in vitro e in vivo de una nueva línea celular (ipc-366) de cáncer inflamatorio mamario canino (imc)comparación con el cáncer de mama inflamatorio humano

Resumo

El cáncer mamario inflamatorio es la neoplasia mamaria más agresiva y de peor pronóstico tanto en la mujer como en la perra. Es considerado un tipo especial de cáncer mamario con características genéticas, biológicas y clínicas diferentes con respecto al resto de los tumores mamarios. La perra ha sido descrita como un buen modelo animal para estudiar el cáncer mamario inflamatorio de la especie humana. Para la investigación en ambas especies, el número de modelos de los que se dispone es limitado. Por ello, la presente Tesis Doctoral comprende la realización de cuatro investigaciones, todas ellas basadas en el establecimiento, caracterización y estudio de una nueva línea celular de cáncer mamario inflamatorio canino: IPC-366, con el objetivo principal de constituir esta línea celular como un buen modelo para la investigación del cáncer mamario inflamatorio canino y humano. Tras nuestros estudios IPC-366 goza de patente en España: P201400512; y se encuentra en tramitación para obtener la patente internacional: WO 2015/197884. Con el fin de caracterizar la línea celular, se evaluaron sus propiedades de crecimiento, citológicas y ultraestructurales, además de la capacidad tumorigénica y el potencial metastásico in vivo así como la determinación de su fenotipo inmunohistoquímico y su patrón cromosómico. Además se comparó esta nueva línea celular canina con la línea celular de cáncer inflamatorio humano SUM149 en términos de capacidad de las células de crecer en condiciones adherentes y no adherentes, expresión del inmunofenotipo de células madre y su producción de proteínas. Por otro lado, se evaluó la capacidad tumorogénica de IPC-366 y SUM149 en ratones macho y se comparó con la de ratones hembra, además de identificar las diferencias en la producción de hormonas esteroides en los tumores originados en ambos sexos. Por último se validó una técnica de EIA amplificado para la detección de hormonas esteroides en medio de cultivo celular de IPC-366 y SUM149 y se evaluó su perfil de producción de hormonas esteroides en condiciones in vitro. La línea celular IPC-366 es una línea celular de tipo basal, triple negativa, altamente maligna y de crecimiento rápido en ratones inmunodeprimidos. Está formada por células grandes, redondeadas o poligonales caracterizadas por marcadas atipias, con núcleos grandes, de evidente malignidad, nucléolos prominentes y con la aparición frecuente de células multinucleadas. En algunas de ellas se aprecian espacios vacíos citoplasmáticos, cubiertos por la membrana citoplasmática, con un gran hueco central, asemejándose a células endoteliales capilares, fenómeno que se ha descrito como mimetismo vascular. Además, IPC-366 y SUM149 presentan una morfología similar en condiciones adherentes y no adherentes. Presentan un inmunofenotipo de expresión de marcadores de células madre similar con características mesenquimatosas y una sobreexpresión de las proteínas E-cadherina y N-cadherina mayor en los cultivos adherentes que en los no adherentes. Por otro lado, los ratones de ambos sexos son capaces de reproducir tumores, presentando un crecimiento tumoral similar. Ambas líneas celulares producen metástasis a distancia en pulmones, presentando las hembras mayores tasas metastásicas que los machos. Se observó que los niveles hormonales intratumorales son cruciales en el desarrollo y progresión de estas neoplasias. Por último IPC-366 y SUM149, en condiciones in vitro, son capaces de producir hormonas esteroides que pueden ser cuantificadas mediante la técnica de EIA de amplificación con alta sensibilidad, fiable y precisa validada en este estudio. Como conclusión, todos estos estudios han demostrado que IPC-366 es una herramienta útil para el estudio comparativo del cáncer mamario inflamatorio canino y humano ofreciéndose la posibilidad futura de realizar ensayos de nuevas estrategias terapéuticas para esta enfermedad de tan difícil tratamiento.