Papel de RIAM en la invasión y en la dinámica de las adhesiones focales de células de melanoma

Abstract

Papel de RIAM en la invasión y en la dinámica de las adhesiones focales de células de melanoma: RIAM, un miembro de la familia MRL (Mig-10/RIAM/Lamellipodin), interacciona con Rap1 activo, una pequeña GTPasa que se encuentra frecuentemente activada en tumores tales como el melanoma y el cáncer de próstata. En esta tesis demostramos que RIAM se expresa en muestras de melanoma metastático humano y en líneas celulares de melanoma, y que tanto RIAM como Rap1 son requeridas para la invasión de estas células. Asimismo, mostramos que la expresión de RIAM confiere ventajas en el crecimiento y la metástasis a las células de melanoma BLM, altamente invasiva, como pudo observarse en modelos de xenografting en ratones SCID. Nuestros resultados indican que la invasión defectuosa de las células silenciadas para RIAM es debido a un mantenimiento deficiente de la direccionalidad durante la migración celular, lo cual está asociado con la activación deficiente de la vía Vav2-RhoA-MLC en estas células. La expresión de formas constitutivamente activas de Vav2 y RhoA en las células deplecionadas para RIAM se tradujo en la recuperación parcial de la invasión celular, lo que indica que tanto Vav2 como RhoA contribuyen a esta invasión dependiente de RIA M. Adicionalmente, los datos sugieren que la inhibición de la invasión mostrada por estas células puede ser debida a una contractilidad y a una polarización celular deficientes. Por otra parte, mostramos que el silenciamiento de RIAM se traduce en un a reducción de la adhesión celular dependiente de la integrina ?1, lo cual se correlacionó con una activación deficiente tanto de Erk1/2 como de la fosfatidil-inositol-3-quinasa, dos moléculas centrales en el control del crecimiento y la supervivenci a celulares. En conjunto, estos datos sugieren que RIAM podría contribuir a la proliferación y a la diseminación de las células de melanoma. Dado que RIAM es una proteína presente en las adhesiones focales, en el presente trabajo estudiamos si podría regular la dinámica de renovación de las adhesiones focales, un proceso fundamental para la migración celular. Nuestros resultados mostraron que las células BLM silenciadas para RIAM tienen incrementado el número de adhesiones focales distribuidas e n la parte central de la superficie celular. Experimentos llevados a cabo con nocodazol y análisis mediante FRAP revelaron que estas células tienen un desensamblaje defectuoso de las adhesiones focales. El defecto en la renovación de las adhesiones f