Aspectos higiénicos, seguridad y potencial biotecnológico de enterococos aislados de ánades reales (anas platyrhynchos)caracterización bioquímica y genética de sus bacteriocinas y producción heteróloga en diversos hospedadores

Resumen

Los enterococos constituyen un grupo microbiano de interés dentro de las bacterias lácticas (BAL) colonizando numerosos nichos ecológicos debido a su elevada resistencia a condiciones ambientales adversas y constituyendo una parte esencial de la microbiota intestinal de animales y personas. Sin embargo, su presencia en los alimentos es controvertida, ya que aunque destaca su papel en la conservación y desarrollo de las propiedades organolépticas de los alimentos fermentados y su actividad como probióticos, los enterococos se consideran microorganismos indicadores de contaminación fecal, responsables de infecciones nosocomiales en pacientes sensibles. Dado que otra de las propiedades biotecnológicas de los enterococos radica fundamentalmente en la producción de péptidos antimicrobianos (bacteriocinas) antagonistas del desarrollo de microorganismos alterantes y patógenos, resulta aconsejable en los enterococos aislados de alimentos determinar la correlación entre su potencial higiénico ( producción de bacteriocinas) y seguridad (factores de virulencia), así como evaluar aquellos nichos ecológicos alimentarios que faciliten el aislamiento de enterococos productores de bacteriocinas útiles como conservantes naturales de los alimentos o que puedan permitir su empleo como cultivos iniciadores, protectores o probióticos. Los ánades reales (Anas platyrhynchos) se consideraron un nicho ecológico interesante para el aislamiento y caracterización de enterococos bacteriocinogénicos por su condición de especie de caza, acuática, desarrollada en medios de elevada contaminación química y bacteriológica, migratoria, ubicua y apta para el consumo humano. Del intestino y canal de los ánades reales se aislaron enterococos que fueron evaluad os por su actividad antimicrobiana así como por la presencia de genes que codifican bacteriocinas y factores potenciales de virulencia, lo que permitió el reconocimiento de aislados potencialmente productores de nuevas bacteriocinas. De los microorganismos evaluados, Enterococcus hirae DCH5 y Lactococcus garvieae DCC43, parecían producir sustancias antimicrobianas no descritas, las cuales se purificaron a homogeneidad. Seguidamente, se procedió a la secuenciación bioquímica y genética de la bacteriocina producida por E. hirae DCH5, (hiracina JM79) y a su posterior expresión heteróloga en diversas bacterias lácticas y Pichia pastoris. Por otra parte, de todos los E. faecalis aislados, únicamente E. faecalis DBH18 mostró actividad antimicrobiana en sus sobrenadantes. El ADN genómico de E. faecalis DBH18 se amplificó por PCR y se determinó que codifica los genes ef1097, entL50A-entL50B y un gen similar al entL50B, denominado entJS. La evaluación de la actividad antimicrobiana del producto del gen entJS obtenido mediante experiencias de transcripción/translación in vitro, así como mediante su producción heteróloga en Pichia pastoris, sugieren que entJS es responsable de la producción y expresión funcional del péptido antimicrobiano enterocina JS.