Estudio in vitro e in vivo de la función de la proteína adaptadora Sur8

Abstract

La vía de señalización que componen las proteínas RAS/RAF/MEK/ERK regula aspectos celulares esenciales como la diferenciación, proliferación o migración celular, siendo una de las cascadas más desreguladas en cáncer. La función de los componentes de esta ruta está finamente regulada por una gran variedad de proteínas, entre las que se encuentran proteínas adaptadoras/andamio como Sur8, en la que se ha centrado nuestro estudio. Sur8 (también denominada Shoc2) es una proteína conservada con repeticiones ricas en leucina que actúa como un regulador positivo de la cascada mediante su interacción con RAS, promoviendo la activación de RAF. Con el objetivo de profundizar en la importancia de la función de Sur8 como regulador de la vía RAS/RAF/MEK/ERK, en esta tesis doctoral hemos analizado su papel en diferentes procesos celulares, observando que la reducción en la expresión de Sur8 por silenciamiento génico, incrementa la adherencia y disminuye la proliferación de células HUVEC in vitro, afectando también a su viabilidad. Por otro lado, el silenciamiento de Sur8 en células HeLa reduce dramáticamente su movilidad celular inducida por diferentes estímulos. Siguiendo una aproximación proteómica, combinada con estudios bioquímicos y de microscopía, hemos identificado una posible nueva función de Sur8 en el núcleo celular relacionada con la transcripción y el procesamiento del pre-mRNA. Para el estudio de los efectos fisiológicos derivados de la supresión de Sur8 in vivo, hemos generado líneas de ratones KO condicionales con el exón 2 de Sur8 flanqueado por secuencias LoxP y la recombinasa Cre bajo control de promotores específicos de tejido. El análisis de los animales Sur8flox/flox;K5-CreT/+, KOs para Sur8 en epidermis, muestra como Sur8 es esencial para la regulación de la vía RAS/RAF/MEK/ERK en epidermis in vivo, ya que su deleción resulta en hiperplasia epidérmica, alteraciones en el ciclo del pelo y una fuerte reacción inflamatoria, junto con una dramática disminución de la fosforilación de ERK. Además, los primeros resultados obtenidos en animales adultos KO constitutivos para Sur8 (Sur8flox/flox;UBC-CreERT2 T/+) tras tratamiento con tamoxifeno, muestran la aparición de fenotipos relacionados con un envejecimiento prematuro (encanecimiento, hipoactividad, aumento de peso...). Estos nuevos modelos de ratón ofrecen la oportunidad de profundizar en los mecanismos moleculares y celulares por los cuales Sur8 puede regular distintos procesos in vivo. Además, el desarrollo de este estudio puede dar lugar a nuevas estrategias clínicas usando Sur8 como marcador o como diana terapéutica en el tratamiento de distintas patologías, incluyendo el desarrollo tumoral.