Regulación de la sublocalización celular de h-ras y su especificidad funcional

Resumen

Los experimentos llevados a cabo en esta Tesis Doctoral se centraron en el estudio de la proteína H-Ras a diferentes niveles. Comenzamos analizando los efectos que ejerce H-Ras regulando de manera positiva o negativa numerosos genes. Mediante la técnica de microarrays comprobamos que el número total de genes regulados varía enormemente según la localización subcelular desde la que señalizara H-Ras. El mayor número de genes se regula desde membrana desordenada, mientras que desde balsas lipídicas no se controla específicamente ningún gen. Por otro lado quisimos conocer la localización de H-Ras endógeno en la membrana plasmática bajo diferentes condiciones de crecimiento y/o líneas celulares. Mediante técnicas de separación de los microdominios que componen la membrana plasmática conseguimos ubicar a H-Ras en membrana desordenada o balsas lipídicas y seguir su movimiento. Para estos estudios se emplearon análisis por fraccionamientos de gradientes de sacarosa con los que separamos membrana plasmática de diferentes densidades o distinta solubilidad, así como microscopía confocal de doble marcaje. Dando un paso más en este estudio comprobamos si la presencia de H-Ras en un dominio u otro de la membrana plasmática dependía de su grado de palmitilación y esto se traducía en la activación diferencial de unos efectores frente a otros y un efecto biológico cambiante.