Caracterización de antígenos de excreción-secreción de protoescolex de echinococcus granulosus y su aplicación al inmunodiagnóstico de la hidatiodosis/equinococosis

Resumo

El objetivo de esta Tesis doctoral ha sido la caracterización de los antigenos de posible relevancia serodiagnóstica presentes en los productos de excrecion-secreción generados por los protoescolex de Echinococcus granulosus como consecuencia de su actividad metabolica. Para ello se han empleado tecnicas de caracterizacion bioquimica (determinación de proteinas, electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de SDS y determinacion de actividades enzimáticas) e inmunoquímicas (inmunotransferencia, ELISA, ELISA-inhibición e inmunotransferencia-inhibición). Para la obtención del antígeno de excreción secreción los protoescólex del parasito fueron mantenidos en un medio desarrollado en nuestro laboratorio. Se estudiaron tanto la supervivencia de los mismos como su producción de proteinas a lo largo de todo el periodo de mantenimiento. En los estudios de caracterización inmunoquímica el extracto antigenico de excreción-secreción fue comparado con los extractos antigenicos somatico de protoescolex y de liquido hidatídico, ambos tambien de E.granulosus. Los resultados obtenidos más relevantes se enumeran a continuación: 1. El medio desarrollado en nuestro laboratorio para el mantenimiento de protoescoléx de E.granulosus permite la obtención de antígenos de excreción-secreción de elevada pureza. 2. La fase óptima para la consecución de estos antígenos es la correspondientes a las pirmeras 50 horas de mantenimiento delos protoescolex. 3. La composición proteica del antigeno de excrecion-secreción no muestra diferencias ni entre protoescolex de procedencia hepatica ni entre protoescolex tratados/no tratados con pepsina. 4. El antígeno de excrecion-secreción posee enzimas con actividad fosfatasa, lipasa y glucosidasa, pero no se ha detectado actividad proteasa. 5. Para el serodiagnóstico de la hidatidosis humana mediante ELISA el antígeno somatico es el extracto que proporciona una mayor sensibi