Estudio comparativo de los mutantes dominantes inhibitorios H-Ras N17, K-Ras N-17 y N-Ras N-17

Abstract

La familia Ras GTPasas incluye las isoformas H-Ras, K-Ras y N-Ras. A pesar de sus grandes similaridades bioquímicas y biológicas, en los últimos años se han acumulado un gran número de evidencias que apuntan a que estas proteínas no son funcionalmente redundantes. Una de las estrategias más extendidas para esta familia de GTPasas es la utilización de los mutantes dominantes inhibitorios de Ras, que son capaces de bloquear específicamente la activación de sus respectivas proteínas salvajes. Así, H-Ras N17 ha demostrado ser un reactivo extremadamente útil para estudiar las funciones de Ras. A pesar de lo extendido de su utilización, hasta la fecha no se ha realizado ningún estudio comparativo de las especificidades inhibitorias los mutantes H-Ras N17, K-Ras N17 y N-Ras N17. En este trabajo demostramos que los mutantes H-, K- y N-Ras N17 presentan marcadas diferencias en sus especificidades inhibitorias con respecto a H-, K- y N-Ras. H-Ras N17 es capaz de inhibir la activación de las tres isoformas de Ras. K-Ras N17 inhibe completamente la activación de K-Ras y ligeramente la de H-Ras. N-Ras N17 inhibe principalmente a N-Ras. A la luz de descubrimientos recientes, que apuntan a que las proteínas H-Ras y K-Ras están compartimentalizadas en distintos microdominios membrana plasmática, hemos realizado el primer estudio de la microlocalización celular de N-Ras.En conjunto, nuestros resultados indican que la especificidad inhibitoria de los mutantes Ras N17, está relacionado con la localización de las distintas isoformas de Ras en diferentes microdominios de membrana.