Análisis de la Hipermetilación del gen Septina 9 obtenido del plasma de pacientes afectados de cáncer colorrectal como biomarcador para su seguimiento

Resumen

INTRODUCCION: Aproximadamente el 25% al 40% de los pacientes que se someten a una cirugía curativa de Cáncer Colorrectal (CCR) desarrollarán una recurrencia tumoral durante los 5 años posteriores a la cirugía oncológica. Un protocolo de vigilancia óptimo incluye tomografías computarizadas, colonoscopias y medición de marcadores tumorales como el antígeno carcinoembrionario (CEA) en suero, aunque éste tiene una sensibilidad y especificidad limitadas. Los valores normales de CEA se pueden encontrar en casi el 50% de los cánceres antes de la resección quirúrgica y, a menudo, no aumentan durante las recurrencias La prueba de Septina 9 analiza el estado de metilación del gen SEPT9, el cual se encuentra hipermetilado en pacientes con CCR. Esta prueba se encuentra validada como método de screening en CCR en pacientes que por motivos clínicos, por preferencia personal o por no poder realizarse otros métodos de screening como la SOH o colonoscopias. Aunque la prueba fue diseñada para la detección temprana y el cribado de CCR, debido a la elevada sensibilidad y especificidad encontrada, la justificación es usarla como una herramienta de biomarcador de detección de cirugía curativa y como protocolo de seguimiento de recurrencia OBJETIVOS 1. Confirmar si la detección de la metilación del gen Septina 9 en el DNA libre circulante en plasma, obtenido a partir de una muestra de sangre periférica, tiene valor predictivo para el diagnóstico de CCR dentro de la población de nuestro entorno. 2. Comprobar si la detección de la metilación del gen Septina 9 en el DNA libre circulante en plasma, obtenido a partir de una muestra periférica desaparece después de una resección completa del CCR. 28 3. Determinar la relación entre detección de la metilación del DNA del gen Septina 9, después de una resección completa del tumor, y la posible recurrencia o persistencia del CCR. 4. Establecer el tiempo óptimo para obtener resultados predictivos de la detección de la metilación de la Septina 9 durante la evolución de los pacientes intervenidos quirúrgicamente. MATERIALES Y METODOS El estudio fue desarrollado en 2 fases. La primera fase contó con 10 pacientes diagnosticados de CCR y nos sirvió para dar una respuesta preliminar a los objetivos 1, 2 y 3 y la segunda fase de ampliación contó con 22 pacientes, donde confirmamos los objetivos 1, 2 y 3 y evaluamos el objetivo 4. Se realizó un estudio prospectivo en el Hospital Universitario Fundación Jiménez Díaz, Se extrajeron diez mililitros de sangre periférica de cada paciente en tubos con EDTA, a partir del plasma congelado de los pacientes incluidos, se obtuvo el DNA libre circulante (cfDNA) y posteriormente una reacción de PCR para cuantificar el número de genes metilados. En la fase 1 se obtuvieron las muestras sanguíneas prequirúrgica y a los 3 meses de la cirugía. En la fase 2 se obtuvieron prequirúrgico, a las 5-7 días, mes y 3 meses posteriores a la cirugía. RESULTADOS Se analizaron 32 muestras preoperatorias, la sensibilidad del test para detectar CCR fue del 55,6% y especificidad del 100%. Hubo 22 muestras postquirúrgicas obtenidas a los 5-7 días, la sensibilidad para detectar recidivas tumorales fue del 100% y especificidad de 75%. Las muestras analizadas al mes de la cirugía fueron 21 y tuvieron una sensibilidad y especificidad del 100% y 94,7% respectivamente para 29 detectar los casos de recidiva. Se analizaron 31 muestras postquirúrgicas a los 3 meses y la sensibilidad y especificidad fueron del 66,7% y especificidad del 80%. CONCLUSIONES La detección de la metilación del gen Septina 9 en el DNA circulante en plasma, obtenido a partir de una muestra de sangre periférica, puede ser un método útil, no invasivo y eficaz para screening del CCR en nuestro medio. Además puede predecir las recidivas tumorales del CCR. El tiempo óptimo en nuestra serie para obtener los mejores resultados de predicción en función de los niveles de metilación de Septina 9 fue al mes de la cirugía.