Caracterización de bacteriocinas y desarrollo de herramientas genéticas para su producción heteróloga en otras bacterias lácticas (bal) y en las levaduras pichia pastoris, kluyveromyces lactis, hansenula polymorpha y arxula adeninivorans

Résumé

El trabajo realizado ha permitido la caracterización bioquímica y genética de una bacteriocina de 6.004,2 Da, denominada garvicina ML (GarvML) y producida por Lactococcus garvieae DCC43, aislado de ánades reales (Anas platyrhynchos). La bacteriocina se sintetiz a como un péptido precursor de 63 aminoácidos con una secuencia líder de 3 aminoácidos que, tras ser eliminada, permite la unión covalente de los aminoácidos de la región N-terminal y C-terminal originando una bacteriocina madura de 60 aminoácidos y estructura circular. La GarvML es la primera bacteriocina circular descrita producida por L. garvieae. Durante el desarrollo de este trabajo también se ha procedido a la caracterización bioquímica y genética de las bacteriocinas producidas por Entero coccus faecalis DBH18. Dicha cepa codifica los genes que sintetizan las bacteriocinas enterocina V583 y enterocina L50 (EntL50A y EntL50B) y dos genes más, similares a entL50A-entL50B y denominados entJSA y entJSB, que sintetizan la bacteriocina ente rocina JS (EntJSA y EntJSB). De los resultados obtenidos se concluye que E. faecalis DBH18 codifica múltiples bacteriocinas, posiblemente no limitadas a especies determinadas de enterococos ni al origen alimentario, clínico o ambiental de los enteroc ocos que las codifican. La realización de esta tesis también ha permitido el desarrollo y utilización de herramientas genéticas que han permitido la producción heteróloga y expresión funcional de la hiracina JM79 (HirJM79), producida por E. hirae DCH 5, de la enterocina P (EntP) producida por E. faecium P13, y de la enterocina A (EntA), producida por E. faecium T136, por otras bacterias lácticas (BAL) y por las levaduras Pichia pastoris, Kluyveromyces lactis, Hansenula polymorpha y Arxula adenini nivorans. De gran interés ha sido la utilización de vectores de expresión y la construcción de quimeras génicas que han permitido la clonación, producción y expresión funcional de la EntA por las levaduras P. pastoris X-33EA y K. lactis GG799EA.