Inmunoterapia avanzada como tratamiento de tumores caninos

  1. Martín Carrasco, Clara
Supervised by:
  1. Ana Judith Perisé Barrios Director
  2. Javier García Castro Director

Defence university: Universidad Alfonso X el Sabio

Fecha de defensa: 14 April 2023

Committee:
  1. Verónica Briz Chair
  2. Verónica Salazar Nussio Secretary
  3. Gustavo Ortiz Díez Committee member
  4. Africa Gonzalez-Murillo Committee member
  5. David Sardón Ruiz Committee member

Type: Thesis

Teseo: 805881 DIALNET

Abstract

Utilizando la viroterapia localizada en pacientes caninos que presenten tumores espontáneos, aumentaremos la activación de la respuesta inmune y nos aprovecharemos de la acción replicante del virus que provocará la lisis de las células oncolíticas. Por otra parte, la inmunoterapia basada en TILs aumentará la activación del sistema inmune y también bloquearemos el mecanismo inmunosupresor del tumor. Para lograrlo, proponemos estudiar los mecanismos inmunes y virales a nivel molecular y celular, tanto in vitro como in vivo, con el objetivo final de que los hallazgos que se describan con este trabajo permitan obtener mejores respuestas clínicas que redunden en un mayor beneficio de los pacientes oncológicos. Para lograrlo, proponemos estudiar los mecanismos inmunes y virales a nivel molecular y celular, tanto in vitro como in vivo, con el objetivo final de que los hallazgos que se describan con este trabajo permitan obtener mejores respuestas clínicas que redunden en un mayor beneficio de los pacientes oncológicos. Los principales objetivos son: 1.- Optimización de la expansión y transducción de linfocitos caninos. 1.1.- Generar un vector lentiviral portador de la secuencia de scAnti-PD-1 junto con el gen suicida Timidina Quinasa del virus del Herpes simple tipo 1 (HSV-TK). 1.2.- Aislar PBMC y purificar linfocitos caninos de sangre periférica. Optimizar la expansión in vitro de los linfocitos caninos. Estudiar el fenotipo de los linfocitos expandidos. Transducir el lentivector en linfocitos de sangre periférica y comprobar la expresión de scAnti-PD-1 in vitro. Comprobar la sensibilidad de los linfocitos transducidos a la prodroga Ganciclovir (GCV) in vitro. 1.3.- Aislar TILs de tumores caninos y optimizar la expansión in vitro. Estudiar el fenotipo de los TILs expandidos. Transducir el lentivector en TILs, y comprobar la expresión de scAnti-PD-1 in vitro. Comprobar la sensibilidad de los TILs transducidos a GCV in vitro. 2.- Realizar un banco de tumores y funcionalidad de linfocitos. 2.1.- Obtener explantes de diversos tipos de tumores caninos para generar un banco de tumores. Establecer líneas tumorales primarias y caracterizarlas. 2.2.- Valorar la eficacia de la funcionalidad de los linfocitos/TILs expandidos frente a los diversos tumores in vitro. 3.- Realizar un Ensayo Clínico Veterinario con pacientes caninos que presenten tumores espontáneos utilizando la inmunoterapia propuesta con TILs y la viroterapia con el adenovirus oncolítico ICOCAV. 3.1.- Evaluar la seguridad y la eficacia de la inmunoterapia con TILs y viroterapia. 3.2.- Estudiar la activación del sistema inmune. Caracterizar y cuantificar las poblaciones inmunes activadas tras el tratamiento en sangre periférica. Discernir y cuantificar la activación debida a cada tratamiento. Caracterizar las poblaciones inmunes infiltradas en el tumor después del tratamiento. Cuantificar el infiltrado inmune. Localizar intratumoralmente las poblaciones infiltrantes. 3.3.- Estudiar el papel de la replicación viral en la inmunoterapia . Determinar y cuantificar la replicación viral en el tumor. Estudiar el tropismo viral en otros órganos (hígado). Cuantificar los anticuerpos neutralizantes específicos de adenovirus.